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层析实验冷柜厂家讲解离子交换层析的操作
点击次数:1241 发布时间:2015-11-09 打印本页面 返回
 1、离子交换剂的选择
 
   选择理想的交换剂是提高分辨率和有效成分获得率的重要前提:选择交换剂时应从如下几方面加以考虑。首先要选择对阳离子交换剂或阴离子交换剂,使被分离物质的电9荷与交换剂平衡离子的电荷正负性相同。对于两性离子,应根据其在稳定的pH范围内所带的电荷选择交换剂。其次要对强弱离子交换剂进行选择。离子交换层析中一般不用中强度的交换剂。强性离子交换剂常用于无离子水的制备和分离一些在极端pH时较稳定的化合物。分离生物样品习惯于弱性离子交换剂。第三要选择平衡离子。为了提高交换容量,一般要选择亲合力较小的平衡离子。强性交换剂应分别选择H型和OH型。弱性交换剂应分别选择Na型或Cl型。离子交换树脂含活性基团多、交换容量大、机械强度高、流动速度快,主要用于分离无机离子和氨基酸核苷酸等小分子物质。大分子化合物要用多糖类离子交换剂,因为这些交换剂的电荷基团分布在其表面,大分子化合物要用可很容易的和它们起交换反应。
 
2、缓冲液的选择
 
    缓冲液的选择原则4条:
①阴离子交换剂选用阳离子缓冲液(如氨基乙酸、铵盐、Tris等),阳离子交换剂选用阴离子缓冲液(如乙酸盐、磷酸盐等),以防缓冲离子参与交换过程,降低交换剂的交换容量。
②缓冲液pH值的选择要使被分离物质的电荷与平衡离子电荷的正负性相同。
③选用的缓冲系统对分离过程无干扰。
④要确定一定的离子强度。
 
3、离子交换剂的制备
 
   离子交换剂的制备有如下几个步骤:
①漂洗目的是除去杂质。无论是新启用的,还是再生的交换剂,在处理或转型前都要经过这一步。漂洗是将交换剂在大烧杯中用低于40℃的水反复洗涤,用倾倒法除去细小颗粒(这一步一定要到做位。留下细小颗粒会堵塞层析柱下的尼龙网眼。)直至水清澈无色。
②处理用酸碱轮换浸泡,以便使交换剂带上需要的平衡离子。处理方法为,树脂可用2一4倍0.5mol/LNaoH或0.5momol/LHCI溶液处理。纤维素和葡聚糖只能用0.5mol/LNaoH+0.5mol/LNacl混合溶液或0.5mol/LHCl处理。处理顺序决定于交换剂携带的平衡离子.每次用酸或碱处理后,匀应用水洗至中性.处理的目的除使交换剂带上所需离子外,还可增加交换容量.树脂来讲,通过处理,树脂充分吸水溶胀,使网孔开大,更有利于小分子物质进到颗粒内部进行交换反应。对于纤维素离子交换剂来讲,干的交换剂由于众多氢键的作用,使纤维素分子压的非常密实,导致许多电荷基团被埋藏起来当交换剂经过酸、碱处理后,其电荷基团都转变为带电形式:电荷基团带有同种电荷,则由于电荷的排斥作用使交换剂得到大程度的膨胀,电荷基团充分暴露,从而有利于离子平衡和交换反应。由于强酸强碱可能使这类交换剂分解,所以使用浓度应控制在0.5mol/L以内,处理时间不应超过1.5小时。
③平衡、经处理后,要用大量的水悬浮交换剂,后用缓冲液平衡。
④再生使用过的交换剂,可用一定的方法使其恢复到原来的状
⑤转型离子交换剂有时需要从一种平衡离子转换成另一种平衡离子,这种平衡离子的转换过程叫转型。转型是用含欲转换平衡离子的溶液处理交换剂。

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