实验室层析技术操作原理、步骤及适用范围

 

紫外检测仪、蠕动泵、记录仪、ATK层析系统、层析柜、树脂、样品等。

 

二、实验室层析技术原理

 

由于填料的不同，各个实验室所使用的层析技术的原理也不*相同。但不外乎以下几种基本原理：分子筛作用、离子交换作用、亲和层析作用等等。分子筛作用是由于填料上有一定规格的孔径，分子量大小不一样的样品流过柱子时所受到的作用力不一样，所走的路径也不同，所以流出柱子的时间也就有了差异，不同组分得以分开。离子交换是由于正负电荷的吸引而使样品挂在填料上，改变溶液环境，使样品分子所带的电荷产生变化，从而被洗脱下来，不同组分与柱料的吸附作用力时不同的，从而洗脱条件也是不同的。亲和层析就是柱料与被分离样品特异性的吸附结合一起，从而使被分离物质与其他成份分离开来。

 

三、实验室层析技术适用范围

 

1、蛋白质分子量的测定

 

2、蛋白质的分离纯化

 

3、多糖的分子量测定

 

4、多糖的分离纯化

 

四、实验室层析技术操作步骤

 

1、柱料的前处理

 

2、选择合适直径与长度的层析柱，装柱

 

3、装完柱之后就连上紫外检测器，检验260nm处的吸光值

 

4、用上样缓冲液平衡柱子

 

5、将样品液浓缩后上样

 

6、洗脱液洗脱，部分收集器收集各个组分

 

7、分别测定各个组分的浓度和含量；合并活力峰

 

五、实验室层析技术注意事项

 

1、柱料前处理一定要*，*，将杂质全部除去。

 

2、上样之前柱子平衡要过夜。

 

3、分子筛层析时点样量不能过大，柱面一定要平。

 

4、上样、洗脱时一定要对目标产物跟踪去向。