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实验室层析技术操作原理、步骤及适用范围

发布时间:2015-01-28   点击次数:1199次
 一、实验室层析技术仪器设备
 
紫外检测仪、蠕动泵、记录仪、ATK层析系统、层析柜、树脂、样品等。
 
二、实验室层析技术原理
 
由于填料的不同,各个实验室所使用的层析技术的原理也不完全相同。但不外乎以下几种基本原理:分子筛作用、离子交换作用、亲和层析作用等等。分子筛作用是由于填料上有一定规格的孔径,分子量大小不一样的样品流过柱子时所受到的作用力不一样,所走的路径也不同,所以流出柱子的时间也就有了差异,不同组分得以分开。离子交换是由于正负电荷的吸引而使样品挂在填料上,改变溶液环境,使样品分子所带的电荷产生变化,从而被洗脱下来,不同组分与柱料的吸附作用力时不同的,从而洗脱条件也是不同的。亲和层析就是柱料与被分离样品特异性的吸附结合一起,从而使被分离物质与其他成份分离开来。
 
三、实验室层析技术适用范围
 
1、蛋白质分子量的测定
 
2、蛋白质的分离纯化
 
3、多糖的分子量测定
 
4、多糖的分离纯化
 
四、实验室层析技术操作步骤
 
1、柱料的前处理
 
2、选择合适直径与长度的层析柱,装柱
 
3、装完柱之后就连上紫外检测器,检验260nm处的吸光值
 
4、用上样缓冲液平衡柱子
 
5、将样品液浓缩后上样
 
6、洗脱液洗脱,部分收集器收集各个组分
 
7、分别测定各个组分的浓度和含量;合并活力峰
 
五、实验室层析技术注意事项
 
1、柱料前处理一定要彻底,完全,将杂质全部除去。
 
2、上样之前柱子平衡要过夜。
 
3、分子筛层析时点样量不能过大,柱面一定要平。
 
4、上样、洗脱时一定要对目标产物跟踪去向。
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